脂質體法采用陽離子脂質轉染體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質。此外,脂質體體外轉染同時適用于瞬時表達和穩(wěn)定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA轉入動物和人的體內用于基因治療。
人工合成的陽離子脂質體和帶負電荷的核酸結合后形成復合物,當復合物接近細胞膜時被內吞成為內體進入細胞質,隨后DNA復合物被釋放進入細胞核內.利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性,因此脂質體與質粒的比例,細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題。
電穿孔法常用來轉染如植物原生質體這樣的常規(guī)方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈沖的強度和持續(xù)時間有關系,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內,這種方法適用于培養(yǎng)的細胞核在體的細胞。
葡聚糖是較早應用哺乳動物細胞(小鼠細胞、大鼠細胞各類傳代細胞等)轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地用用于瞬時表達的研究,但用于穩(wěn)定轉染卻不是十分可靠。
磷酸鈣共沉淀法因為試劑易取得、價格便宜而被廣泛用于瞬時轉染和穩(wěn)定轉染的研究,先將DNA和CaCl2混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,較后把含有沉淀的混懸液加到培養(yǎng)的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解。
磷酸鈣法 穩(wěn)轉,瞬轉 不適用于原代細胞,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用;
陽離子脂質體法 穩(wěn)轉,瞬轉所有細胞 適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大;
電穿孔法 穩(wěn)轉,瞬轉所有細胞 適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大;
DEAE-右旋糖苷法 瞬轉 相對簡便、結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清;
病毒介導法 穩(wěn)轉 可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等;
腺病毒 瞬時轉染特定宿主 可用于難轉染的細胞需考慮安全因素;
Biolistic顆粒傳遞法瞬轉 可用于人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞;
顯微注射法 穩(wěn)轉,瞬轉 轉染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。